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VIRA-PORE空氣病毒采樣盒

空氣采樣盒，用于收集病毒顆粒

具有ZePore™過濾器的Vira-Pore病毒采樣盒經(jīng)過專門設(shè)計和驗證，可用于收集空氣傳播中的冠狀病毒，并且它可用于采樣其他類似的病毒。

目標(biāo)

為了確定冠狀病毒空氣采樣的合適參數(shù)，本驗證采用直徑37mm孔徑1 µm的PTFE層壓“ ZePore” 空氣病毒過濾器對冠狀病毒的替代物--人類冠狀病毒OC43（HCoV OC43）進(jìn)行空氣采樣。 人冠狀病毒OC43和COVID病毒均為正向單鏈RNA（+ ssRNA）β包裹的冠狀病毒，因此OC43是合適的COVID病毒模擬物。 通常以往在過濾器上進(jìn)行病毒采樣的研究沒有包括基本的驗證數(shù)據(jù)，例如確定從過濾器上洗脫病毒的合適技術(shù)，在采樣過程中或在運(yùn)輸及存儲過程中病毒在過濾器上的穩(wěn)定性等數(shù)據(jù)。

方法

標(biāo)準(zhǔn)化病毒空氣采樣的持續(xù)時間，提取洗脫的病毒RNA，然后用超微量核酸蛋白分析儀進(jìn)行RNA定量（ng / µL為單位），采用熒光定量PCR儀對現(xiàn)場樣品進(jìn)行測試，所有實驗均重復(fù)三次（除非另有說明）。實驗結(jié)果采用病毒相對回收質(zhì)量（relative recovery）來表示。病毒相對回收質(zhì)量（RRmass）是從過濾器洗脫的病毒質(zhì)量濃度（ng / ml）相對于初始霧化器懸浮液中病毒質(zhì)量濃度（ng / ml）的比率。過濾器安裝在“開口式”的37mm三層導(dǎo)電聚丙烯盒中。導(dǎo)電盒優(yōu)選用于空氣微粒采樣，以防止靜電吸附到盒壁。空氣流量初步設(shè)置為10 L / min，方便在短時間內(nèi)較大程度地收集病毒。帶有過濾器和支撐墊的壓降為17英寸水壓，與某些個人采樣泵（例如Gilian 12或GSA SG10或SG10-2）兼容。空氣樣品以10 L / min的流量進(jìn)行病毒顆粒空氣采樣10分鐘，同時另一個樣品采用對過濾器加標(biāo)病毒顆粒懸浮液，兩個樣品均使用兩種不同的方法對病毒RNA進(jìn)行洗脫。兩種情況下回收率均較高的洗脫方法都是將濾膜向內(nèi)卷起來，然后將其放入裝有1 mL MTM培養(yǎng)基（Longhorn Vaccines and Diagnostics™，Inc。）的2 mL微量離心管中，并渦旋三次，每次渦旋10秒。霧化病毒懸浮液是使用Collison霧化器在II級生物安全柜中產(chǎn)生的。此過程產(chǎn)生的平均空氣傳播顆粒濃度為～1 x 10^8/ L。進(jìn)行空氣采樣，采樣10分鐘，60分鐘后，立即將濾膜中的病毒洗脫下來， 或采樣10分鐘將其暴露在清潔的氣流中60分鐘再洗脫病毒。 

結(jié)果

對于采樣10分鐘的樣品，RNA質(zhì)量濃度和RRmass（圖1中的紫色條）分別為2.0 x 10^6 ng / mL（±1.06 x 10^6）和0.55（±0.18）。對于采樣60分鐘的樣品，平均RNA質(zhì)量濃度為5.98 x 10^6 ng / mL（±1.79 x 10^6），調(diào)整采樣時間后的RRmass（圖1中的藍(lán)色條）為0.32（±0.10）。在采樣10分鐘的樣品中，然后將其暴露在清潔的氣流中60分鐘，RNA質(zhì)量濃度和RRmass（圖1中的橙色條）分別為2.17 x 10^6 ng / mL（±6.97 x 105）和0.50（±0.16）。這些結(jié)果表明，在分別采樣10分鐘，60分鐘和10分鐘，然后暴露于清潔氣流60分鐘后，霧化病毒的回收率是相似的，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p = 0.31）。在另一個實驗中，空氣樣本分別在4°C和25°C下存儲7天。在4°C下，RNA質(zhì)量濃度為4.41 x 106 ng / mL（±2.51 x 10^6），在25°C下存儲時為1.34 x 10^6 ng / mL（±8.23 x 105）。因此，房間存放條件下的平均濃度比冰箱存放條件下的平均濃度低3.3倍。由于實驗的可變性，差異沒有顯著差異（p = 0.11）。如圖1所示，4°C存儲（綠色條）和25°C存儲（黃色條）的RRmass分別為0.55（±0.31）和0.17（±0.10）。通過qRT-PCR進(jìn)一步分析了上述每組實驗中的一個洗脫樣品，以顯示總RNA分析方法未產(chǎn)生誤導(dǎo)性結(jié)果。 對于這兩個樣品，檢測到的RNA濃度相似：每毫升4.01 x 10^6 RNA拷貝（用于4°C儲存）和每毫升4.18 x 10^6 RNA拷貝（用于25°C儲存）。對于這兩個樣品，qRT-PCR的CT值均高于30，是接近檢測下限的Ct值。 這可以解釋兩個微量樣品之間值的相似性，以及為什么與總RNA分析不同，兩個樣品之間的差異不明顯。 在進(jìn)行進(jìn)一步工作之前，建議在分析之前將樣品冷藏保存。

結(jié)論

•COVID病毒的替代物人類冠狀病毒OC43（HCoV OC43）被成功霧化，收集并回收用于分析。

•與搖床方法相比，渦旋洗脫產(chǎn)生更高的RNA濃度。

•在三種不同的采樣場景（10分鐘，60分鐘和10分鐘后暴露于60分鐘的清潔氣流）后，從過濾器中回收霧化病毒的差異沒有顯著差異。

•比較在4°C和25°C儲存后病毒的回收率，與在25°C儲存后相比，病毒在4°C儲存后的回收率高約3倍； 但是，由于實驗的可變性，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。

注意：VIRA-PORE病毒采樣盒已經(jīng)過測試可從COVID替代病毒中回收RNA病毒，但尚未測試過從COVID病毒中收集RNA病毒。 請參閱技術(shù)摘要說明的測試方法和測試結(jié)果。 客戶應(yīng)自己負(fù)責(zé)遵守（i）產(chǎn)品使用說明和（ii）收集空氣傳播的病毒后，與產(chǎn)品的使用和安全處理以及包裝，標(biāo)簽和運(yùn)輸有關(guān)的所有適用的政府法律，規(guī)則，法規(guī)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。生產(chǎn)商建議您在進(jìn)行任何空氣采樣之前，先向具有病毒專業(yè)知識的合格環(huán)境微生物實驗室尋求指導(dǎo)。 尋求指導(dǎo)，安全的處理和運(yùn)輸程序，因為COVID病毒是高度傳染性的病原體，如果暴露則具有重大健康隱患。